培养条件：本细胞系由DJGriad通过肺癌组织移植建立，患者为58岁白人男性。为了优化细胞生长，我们采用以下培养条件：气相组成为95%空气加5%二氧化碳，培养温度为37℃，培养基为F12K培养基，搭配10%的胎牛血清(FBS)和1%的青霉素/链霉素(P/S)。

传代方法：在细胞汇合度未超过80%时，需将瓶装的完全培养液收集至离心管中，保留5ml培养基于37℃、5% CO2的环境中继续培养；若细胞密度超过80%，即可进行传代。

具体的贴壁细胞传代步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙镁的PBS对细胞进行1-2次润洗。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞是否均匀变圆并脱落。
3. 在消化终止后，轻轻吹打细胞以确保完全脱落，再将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟，弃上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2比例分装至新T25培养瓶中，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

悬浮细胞传代步骤：

1. 采取半换液法，将培养瓶竖放于培养箱中静置1小时，轻轻吸掉3ml的培养基，并补加3ml新的完全培养基。
2. 如需分瓶，可将细胞悬液收集至离心管，1000rpm离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml培养基后重悬，然后按1:2的比例分装入新培养瓶中，添加6-8ml新的完全培养基，以保持细胞的生长活力。

细胞冻存：细胞生长至培养瓶80%覆盖面积时，弃去培养液并用PBS进行了冲洗。接着添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，待细胞变圆后终止消化并重悬，随后将细胞沉淀分配至冻存管中并加入适量无血清冻存液，快速放入-80℃保存，24小时后可移入液氮罐中。

细胞复苏：取出冻存管后快速置于37℃水浴中解冻，待无结晶后用75%的酒精擦拭外壁，随后将细胞移至含5ml完全培养基的离心管进行再悬浮，接着接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中培养，并在第二天更换为新鲜培养基。

其他注意事项：运输过程中，部分细胞可能会因贴壁不牢而脱落，这是正常现象。若脱落细胞较多，可将所有培养液收集进行离心处理，并根据需进行再培养。

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